線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶生化試劑盒（微量法）操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
假交替單胞菌
鼠李糖乳桿菌
雙歧雙歧桿菌
粘質(zhì)沙雷氏菌
噬糖鹽紅菌
師崗鏈霉菌
委內(nèi)瑞拉鏈霉菌
枯草芽孢桿菌
彎曲芽孢桿菌
缺陷短波單胞菌
副凝聚短狀桿菌
氧化微桿菌
硝基還原假單胞菌
肺炎克雷伯氏菌
成團腸桿菌(成團泛菌)
乙酸鈣不動桿菌
成團腸桿菌
瓊氏不動桿菌
尿腸球菌
銅綠假單胞菌
阿爾萊特葡萄球菌
地衣形芽孢桿菌
米氏硫胺素芽孢桿菌
溶酪葡萄球菌
調(diào)料葡萄球菌
法氏檸檬酸桿菌
發(fā)酵乳桿菌
抗輻射不動桿菌
巴氏葡萄球菌
