正常人食管鱗狀上皮細胞細胞培養(yǎng)步驟

正常人食管鱗狀上皮細胞細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

莪術(shù)烯醇 Curcumenol 19431-84-6
呋喃二烯 Furanodiene 19912-61-9
莪術(shù)烯 Curzerene 17910-09-7
新莪術(shù)二酮 Neocurdione 108944-67-8
莪術(shù)呋喃酮 Curzerenone 20493-56-5
N-反式香豆酰酪胺 N-pcoumaroyltyramine 36417-86-4
棍掌堿 Coryneine 7224-66-0
管花苷A Tubuloside A 112516-05-9
管花苷B Tubuloside B 112516-04-8
甘露三糖 Manninotriose 13382-86-0 
桂二萜醇 Cinnzeylanol 62394-04-1
構(gòu)樹寧A Broussonin A 73731-87-0
E-藁本內(nèi)酯 E-Ligustilide
格蘭地新 Groenlandicine 38691-95-1
旱蓮苷A Ecliptasaponin A 78285-90-2
旱蓮苷D Ecliptasaponin D 206756-04-9
紅花素 Carthamidin 479-54-9
華蟾毒它靈 Cinobufotalin 1108-68-5
環(huán)氧澤瀉烯 Alismoxide 87701-68-6
黃柏內(nèi)酯 Obaculactone 1392-24-1
黃芪異黃烷苷 Isomucronulatol-7-O-glucoside 94367-43-8
4-甲基傘形酮 4-Methylumbelliferone 90-33-5
甲基麥冬高黃酮A Methylophiopogonone A 74805-90-6
原兒茶醛 Protocatechualdehyde 139-85-5
異蓮花掌苷 Isolindleyin 87075-18-1