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地塞米松檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)步驟詳解

發(fā)表時(shí)間:2020-03-04

地塞米松檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本100μl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50μl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光反應(yīng)30分鐘。

3 洗    滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100μl/孔,25℃避光反應(yīng)30分鐘。

5 洗    滌:同上

6 顯    色:加底物液A 50μl/孔,再加底物液B 50μl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。

7 終    止:每孔加入終止液50μl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

8 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

 結(jié)果分析

1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?/p>


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